UNIVERSIDAD AUTÓNOMA DE NAYARIT
UNIDAD ACADÉMICA DE CIENCIAS QUÍMICO BIOLÓGICAS Y
FARMACÉUTICAS
PROGRAMA DE QUÍMICO FARMACOBIÓLOGO
BACTERIOLOGÍA MÉDICA
PRACTICA No.3
EXUDADO FARÍNGEO Y PROCESAMIENTO DE ESPUTO
Q.F.B.
DORA LILIANA LUNA VÁZQUEZ
Q.F.B.
CARLOS ISIDRO RODRÍGUEZ MORALES
Q.F.B.
NADIA ROXANA MARTÍNEZ RUBIO
24 alumnos: 8
equipos de tres personas
INTRODUCCIÓN
Existen diferentes tipos de muestras que pueden ser
tomadas para el análisis de una infección bacteriana de las vías aéreas
superiores. Podemos mencionar el exudado amigdalino, nasofaríngeo, nasal y el
faríngeo, siendo este último el más empleado u ordenado por los médicos.
Estos tipos de muestras contienen una flora bacteriana
normal, que debe de conocerse para no confundirla con los microorganismos
patógenos más comúnmente encontrados en dichas vías.
La flora normal que podemos encontrar en las
diferentes muestra de vías aéreas superiores son:
ü Streptococcus
viridans (a y no hemolítico)
ü Neisseria no patógena
ü Branhamella
catarrhalis
ü Staphylococcus
epidermidis
Los patógenos que más frecuentemente se encuentran en
este tipo de muestras son:
ü Streptococcus b - hemolítico
ü Corynebacterium
diphteriae
ü Haemophilus
ü Listeria
ü Candida
albicans
ü Neumococo
ü Staphylococcus
aureus coagulasa positivo
PROPÓSITO
ESPECÍFICO DE LA PRÁCTICA
Tomar una muestra de exudado faríngeo para el
aislamiento, caracterización y tratamiento de un microorganismo patógeno.
CRITERIOS
DE DESEMPEÑO
La persona estará capacitada para el análisis de una
muestra de exudado faríngeo cuando:
- Aprenda el procedimiento adecuado de una toma de muestra de exudado faríngeo.
- Utilice las técnicas de tinción mas adecuada para la orientación hacia el microorganismo.
- Sepa elegir los medios de cultivo adecuados para el aislamiento de un microorganismo patógeno encontrado en una muestra de exudado faríngeo.
- Elija y utilice las pruebas bioquímicas adecuadas, para la caracterización de la cepa patógena aislada.
- Indique el antibiótico de mayor efectividad contra la cepa aislada y caracterizada
- Sepa elegir los colorantes adecuados para realizar la tinción y observar al microscopio.
- Sepa cuando y como tomar la muestra para su investigación.
- Que conozca como evaluar la calidad de la muestra.
DESARROLLO DE LA PRÁCTICA
A) Metodología para exudado faríngeo
Toma de
muestra
I.
Siempre que
sea posible la muestra debe obtenerse antes de la administración de la terapia
antimicrobiana.
II.
Se le pide al
paciente que no se enjuague la boca, no se lave los dientes y no haya ingerido
ningún tipo de alimento antes de tomar la muestra.
III.
La muestra se
toma con un hisopo de algodón estéril, puede estar previamente humedecido con
caldo nutritivo.
IV.
Se le pide al
paciente que abra la boca, la cara debe encontrarse cerca del mechero para
evitar contaminación.
V.
Se detiene la lengua con un abatelenguas, y se
expone la faringe adecuadamente y con buena luz.
VI.
Se pasa el
hisopo sobre la faringe, haciendo presión sobre las regiones inflamadas o
ulceradas.
VII.
Se saca el
hisopo evitando que toque la lengua, dientes o labios, así como también evitar
que la muestra sea contaminada con saliva o en su paso por la boca.
VIII.
Si la muestra
no va ser procesada de inmediato se coloca en algún medio de transporte
(Stuart).
Procesamiento
de la muestra
Medios de
cultivo:
Se toma el hisopo y se coloca un poco de muestra en una
pequeña área de cada medio de cultivo, posteriormente se siembra por el método
de aislamiento de colonias a partir del inóculo realizado con el hisopo, en los
siguientes medios y con el siguiente orden:
·
Agar sangre
·
Salado-
manitol
·
Agar EMB
·
Agar Biggy
Posteriormente se incuban todos los medios de cultivo
a 37°C
por 24 horas.
- Transcurrido el tiempo de incubación, se observan las cajas para ver en cual hubo crecimiento y se anotan las características morfológicas de las colonias.
- De las colonias aisladas se realiza una tinción de Gram para ver sus características morfológicas.
- Posteriormente se realizan a las colonias aisladas las pruebas bioquímicas correspondientes, dependiendo de la morfología vista al microscopio.
- Si se observan colonias características de estreptococos o estafilococos en el agar sangre y/o en el agar salado-manitol y al observarse al microscopio resultan ser cocos Gram (+), proceder como se indica en el siguiente esquema:
Metodología
de las pruebas bioquímicas:
- Prueba de la catalasa: con un asa en pico recoge una colonia pura y colocar sobre un portaobjetos. Agrega una gota de H2O2 sobre la muestra en el portaobjetos. Observa inmediatamente la formación de burbujas o efervescencia. Hay que evitar arrastrar partículas del agar sangre junto con la colonia elegida, pues el contacto de la sangre con el H2O2 produce efervescencia.
- Prueba de la coagulasa: inocular la colonia pura en estudio con un asa en pico en 2 -3 mL de plasma humano citratado contenido en un tubo. Incubar durante 4 horas y observa la formación de un coágulo.
- Prueba de la DNAsa: con un asa calibrada, tomar la colonia en estudio y sembrarla en el agar DNAsa , haciendo varias estrías juntas para que las colonias se desarrollen formando una franja.. Incubar por 24 horas. Cubrir el medio sembrado con HCl 1N, y observar la formación de un halo transparente alrededor.
- Prueba de la optoquina: con un asa en pico, tomar la colonia en estudio y estriar una cuadrícula de aproximadamente 3 cm por lado en un agar sangre. Posteriormente, con una pinza estéril, toma un disco de optoquina y colócalo en el centro de la cuadrícula, presionándolo un poco con la misma pinza para que no se desprenda del agar. Incuba la caja por 24 horas y observa la presencia de un halo de inhibición.
- Prueba de la bacitracina: se procede igual que con la prueba de la optoquina, pero se utiliza un disco de bacitracina en lugar de el de optoquina.
Programación
de las sesiones de práctica:
Primera sesión:
- Toma de exudado faríngeo.
- Siembra en medios de cultivo de la muestra de exudado y las cepas de estafilococos y estreptococos proporcionadas por el docente.
Segunda sesión:
- Revisión de medios de cultivo: observación y descripción de las colonias desarrolladas en los medios de cultivo.
- Tinción de Gram de las colonias de estafilococos y estreptococos desarrolladas en los agares salado manitol y sangre, respectivamente.
- Realizar la prueba de catalasa a las colonias de estafilococos y estreptococos que crecieron en los agares salado manitol y sangre, respectivamente.
- Realizar la prueba de coagulasa a colonias de los estafilococos del agar salado manitol.
- Realizar la prueba de DNAsa a colonias de los estafilococos del agar salado manitol, y las pruebas de optoquina y bacitracina a los estreptococos del agar sangre.
Tercera
sesión:
- Observación de los resultados obtenidos en las pruebas de coagulasa, DNAsa, optoquina y bacitracina.
CUESTIONARIO
- Describe los diferentes tipos de hemólisis observados en el agar sangre, y explica cuál es su utilidad diagnóstica.
- Explica cuándo se utilizan, el fundamento, la técnica y cómo se interpretan las siguientes pruebas:
a) Prueba de la coagulasa
b) Prueba de la catalasa
c) Prueba de Camp
d) Prueba de bacitracina
e) Prueba de la DNAsa.
f) Prueba de optoquina
g) Prueba de novobiocina
h) Prueba de polimixina
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