Práctica #4 Identificación de Vibrio

UNIVERSIDAD AUTÓNOMA DE NAYARIT

UNIDAD ACADÉMICA DE CIENCIAS QUÍMICO BIOLÓGICAS Y FARMACÉUTICAS

PROGRAMA DE QUÍMICO FARMACOBIÓLOGO

BACTERIOLOGÍA MÉDICA

PRACTICA No.4

Aislamiento e identificación de Vibrio 

Q.F.B. DORA LILIANA LUNA VÁZQUEZ

Q.F.B. CARLOS ISIDRO RODRÍGUEZ MORALES

Q.F.B. NADIA ROXANA MARTÍNEZ RUBIO

INTRODUCCIÓN

El genero Vibrio engloba un grupo heterogéneo de microorganismos que muestran similitudes fenotípicas. Las especies de este género, se encuentran ampliamente distribuidas en la naturaleza. Son bacterias acuáticas que habitan en ríos, lagos, acuarios y en océanos de todo el mundo. Dentro de este género, Vibrio cholerae es una especie de gran importancia médica, ya que es un microorganismo patógeno para el hombre.

Vibrio cholerae es un  bastoncillo curvo en forma de coma, corto, que mide aproximadamente 1.5 a 3 mm de longitud, y 0.5 mm de anchura, medida en su punto más amplio. Tiene motilidad activa gracias a un flagelo polar, son microorganismos Gram negativos, y además no forman esporas. Estos microorganismos son capaces de crecer en medios con sal, pero no la requieren para vivir. Es anaerobio facultativo, vive en un pH muy elevado de 8.5 a 9.5, y lo destruye la acidez rápidamente. Crece bien a 37°C en muchas clases de medios. Las colonias son usualmente húmedas y mucoides, particularmente sobre medios que contengan sales biliares. Es el agente etiológico causante de la enfermedad diarreica denominada cólera, la cual puede producir una deshidratación profunda y rápidamente progresiva en pocas horas, con fallecimiento del enfermo.

Las heces tienen un aspecto característico: líquido no bilioso, gris ligeramente opaco, con restos de moco, células epiteliales y un gran numero de Vibrio cholerae, sin sangre y un olor ligeramente dulce, inofensivo.

Vibrio cholerae produce una potente enterotoxina, que fisiológicamente actúa elevando los niveles de AMPc, lo que provoca un aumento de la secreción de agua y electrolitos a la luz intestinal. Muchos agentes antimicrobianos son eficaces contra Vibrio cholerae como las tetraciclinas, ampicilinas, cloramfenicol, eritromicina y ciprofloxacina, siendo resistente a furazolidona y trimetroprim-sulfametoxazol. Es susceptible a la desecación, ebullición, cloro y desinfectantes. La enfermedad se transmite por contagio con individuos con enfermedad leve o inicial, y por agua, alimentos o moscas. El control de la enfermedad descansa en la educación y en el mejoramiento sanitario, en particular de los alimentos y el agua. Es necesario aislar a los individuos, desinfectar sus excretas y vigilar a los contactos.

PROPÓSITO ESPECÍFICO DE LA PRÁCTICA

Realizar la identificación de Vibrio cholerae a partir de material fecal, para que el alumno aprenda a los medios y pruebas bioquímicas útiles para su diagnostico.

CRITERIOS DE DESEMPEÑO

La persona estará capacitada para el análisis de una muestra fecal y de realizar el aislamiento de Vibrio cholerae cuando:

ü Utilice las técnicas de tinción mas adecuada para la orientación hacia el microorganismo.

ü Sepa elegir los medios de cultivo adecuados para el aislamiento de un microorganismo patógeno encontrado en una muestra fecal.

ü Elija y utilice las pruebas bioquímicas adecuadas, para la caracterización de la cepa patógena aislada.

 

DESARROLLO DE LA PRÁCTICA

 

Metodología

Se procesará como si fuera excremento una cepa de Vibrio cholerae  proporcionada por el encargado del laboratorio.

Primera sesión

1.       Sembrar la cepa en agar TCBS y agar MacConkey con sembrado de aislamiento e incubar 24 horas a 37° C.

Segunda sesión:

1. Hacer una tinción de Gram de las colonias desarrolladas y observar al microscopio. 

2. Observar morfología colonial y hacer pruebas de oxidasa de las colonias desarrolladas:

En un portaobjetos colocar en disco para oxidasa, manejarlo con pinzas en condiciones estériles.

Con el asa tomar un pico de colonia y colocar sobre el disco, esperar 10 segundos y observar el cambio de color.

Positiva= Color rosa, marrón o negro.

Negativa= No cambio de color.

3. Realizar la prueba del collar o filamentosidad (string-test): Colocar sobre un portaobjetos unas gotas de desoxicolato de sodio, agregar con el asa una porción de colonias desarrolladas en el agar TCBS. Si la prueba es

Positiva = Viscosa y se forma un hilo al levantar el asa.

Negativa = No hay cambios.

4.  Inocular una de las colonias del agar TCBS  en los siguientes medios de pruebas bioquímicas:

• Urea
• MIO
• LIA
• Caldo BHI a 0, 1, 6, 8, 10 % de NaCl.

5.  Incubar todos los tubos por 24 horas a 37° C.

Tercera sesión:

Observar los resultados de las pruebas bioquímicas y la turbidez en los caldos BHI a diferentes concentraciones de NaCl.

CUESTIONARIO

1. ¿Cuál es el medio de transporte ideal utilizado para muestras sospechosas de estar contaminadas con Vibrio cholerae?

2.  En la búsqueda de Vibrio cholerae en muestras de excremento o alimentos, se hace una primera siembra de éstos en agua peptonada alcalina. ¿Para qué se realiza esta primera siembra?

3.  Explica el fundamento del agar TCBS y MacConkey. ¿Por qué se utilizan en la identificación de Vibrio cholerae?

4.  ¿Por qué se hace la prueba de oxidasa a las colonias desarrolladas en el agar MacConkey?

5.    Explica el fundamento de la prueba de la cuerda (también llamada de filamentosidad o collar). 

6.    Explica por qué se utilizan las pruebas de urea, MIO, LIA y el caldo BHI a distintas concentraciones de NaCl y como interpretamos sus resultados para la identificación de Vibrio.