Práctica #7: exudado vaginal

UNIVERSIDAD AUTÓNOMA DE NAYARIT

UNIDAD ACADÉMICA DE CIENCIAS QUÍMICO BIOLÓGICAS Y FARMACÉUTICAS

PROGRAMA DE QUÍMICO FARMACOBIÓLOGO

BACTERIOLOGÍA MÉDICA

PRACTICA No.7

Exudado vaginal

Q.F.B. DORA LILIANA LUNA VÁZQUEZ

Q.F.B. CARLOS ISIDRO RODRÍGUEZ MORALES

Q.F.B. NADIA ROXANA MARTÍNEZ RUBIO

INTRODUCCIÓN

El exudado vaginal es remitido al laboratorio para el diagnóstico de vaginitis, una inflamación de la vagina, y vaginosis, una alteración del equilibrio de la flora vaginal sin inflamación. Las infecciones vaginales son aquellas en las cuales  el agente etiológico coloniza la mucosa vaginal produciendo secreción asintomática.  Los tres agentes etiológicos  más importantes son la flora vaginal mixta aeróbica y anaeróbica, levaduras y Trichomonas vaginalis, menos común es el Streptococcus agalactiae y Staphylococcus aureus.

La causa de vaginitis/vaginosis no puede determinarse sólo sobre la base de los síntomas clínicos o el examen físico. Para realizar el diagnóstico correcto se requiere la evaluación microscópica del exudado vaginal. Los métodos de cultivo son menos útiles para el diagnóstico de algunas entidades vaginales. La evaluación microscópica requiere analizar tres características:

·      Aspecto de las células epiteliales

·      Aspecto del germen dominante y/o morfotipos presentes

·      La presencia o ausencia de leucocitos.

Vaginosis bacteriana: antiguamente se le denominaba vaginitis no específica o vaginitis a Gardnerella vaginalis, fue renombrada por su característica de carecer el exudado de células inflamatorias, su olor fuerte a pescado es por la producción de poliaminas durante  el metabolismo bacteriano. En la flora vaginal se observa un aumento de 100 veces la concentración de Gardnerella vaginalis;  1000 veces la concentración de  bacterias anaerobias como: Prevostella, Mobiluncus, Peptostreptococci y bacteroides. La secreción presenta un pH > 4,5 y se visualizan células "clue" (células epiteliales escamosas con un halo oscuro producido por las bacterias adheridas a su exterior), gran cantidad de leucocitos polimorfonucleares, bacilos gram negativos pleomórficos y cocobacilos grampositivos. Esta infección también está asociada a infecciones post-operatorias de histerectomía, cesáreas, pos-aborto e infecciones urinarias.

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OTRAS INFECCIONES

Candidiasis vulvovaginal: C. albicans forma parte de la flora de la vagina en 15-20 % de mujeres sanas y 30- 40 % de mujeres embarazadas. La distinción entre candidiasis vulvovaginal y colonización asintomática es difícil porque los signos y síntomas indicativos de candidiasis se solapan con otras patologías vaginales. En muchos laboratorios se usa la tinción de Gram y parece que proporciona el método más exacto de identificación de la enfermedad, de manera similar a la candidiasis muco-oral.

Tricomoniasis: El diagnóstico se basa en un pH mayor de 4,5 de las secreciones vaginales y en la presencia del parásito en movimiento al microscopio (esto en el 60 % de las mujeres sintomáticas, muy baja sensibilidad). Cuando el parásito pierde la movilidad es difícil distinguir a Trichomonas de las células blancas. Por ello es necesario examinar el exudado lo más rápidamente posible tras la obtención de la muestra.

El cultivo es el método más exacto para detectar Trichomonas. 86 al 95 % de los casos se detectan por este método. Basados en el cultivo, 25 - 50 % de las mujeres con infección por Trichomonas vaginalis en un trabajo son asintomáticas. Pueden utilizarse los medios de cultivo Diamond o Roiron.

OTRAS INFECCIONES MENOS FRECUENTES

• Infecciones verdaderas causadas por Mycobacterium tuberculosis, Salmonella sp. y Enterobacteriaceae. Son muy raras y aparecen en pacientes con enfermedad subyacente o enfermedad sistémica.

• Vaginitis por Streptococcus pyogenes, relativamente frecuente en niñas de 3 – 5 años.

• Streptococcus agalactiae. Usualmente presente en la vagina como flora normal pero ocasionalmente causa una vaginitis franca.

• Enterobius vermicularis. En niñas es causa de síntomas vaginales asociado con prurito perianal que aumenta por las noches.

La muestra debe tomarse usando un espejo vaginal y obtener el exudado vaginal con un escobillón. En estudios comparando la sensibilidad de diferentes localizaciones, la toma del exudado vaginal del fornix posterior es más sensible y exacta para realizar el diagnóstico.

PROPÓSITO ESPECÍFICO DE LA PRÁCTICA

Entender el procedimiento de identificación de bacterias del aparato genital a partir de un exudado vaginal y uretral es el objetivo de esta práctica, para que el alumno aprenda que tipos de bacterias se pueden encontrar en el aparato genital tanto del hombre como la mujer.

CRITERIOS DE DESEMPEÑO

La persona estará capacitada para el análisis de una muestra de orina y de realizar el aislamiento de microorganismos cuando:

·      Utilice las técnicas de tinción mas adecuada para la orientación hacia el microorganismo.

·      Sepa elegir los medios de cultivo adecuados para el aislamiento de un microorganismo patógeno encontrado en una muestra de orina.

·      Elija y utilice las pruebas bioquímicas adecuadas, para la caracterización de la cepa patógena aislada.

DESARROLLO DE LA PRÁCTICA

Material y equipo

·      Cajas de Petri

·      Portaobjetos

·      Hisopos estériles

·      Asa en pico y calibrada

·      Algodón

·      Cinta maskin y testigo

·      Papel de estraza

·      Estufa bacteriológica ajustada a 37°C

·      Microscopio

·      Autoclave

·      Mechero

·      Balanza analítica

Medios y reactivos

·      Aceite de inmersión

·      Azul de metileno

·      Lugol

·      Alcohol – cetona

·      Safranina

·      Cristal violeta

·      Agar Sangre

·      Agar EMB

·      Agar Biggy

·      Agar chocolate

·      MIO

·      RMVP

·      Kligler

·      Citrato

·      Urea

·      Reactivo de Kovac´s

·      SSF

·      Azul de metileno

 

Metodología

Toma de muestra

1.       Exudado Vaginal

a)    Prohibir todo lavado vaginal por lo menos desde varias horas antes.

b)   Colocar a la paciente en posición ginecológica, introducir el espejo vaginal y tomar el exudado con hisopos de algodón estéril previamente humedecido con SSF. Hacer el muestreo del saco posterior y del cérvix uterino.

c)   Se utilizan dos hisopos: con el primero, después de obtener la muestra, se hace un frotis y luego se deposita en 2 mL de SSF estéril, para posteriormente hacer la observación microscópica en fresco. El segundo hisopo se deposita en un medio de transporte (Stuart) para realizar los cultivos con él.

Primera sesión:

Examen Microscópico Directo

1. Es el examen citobacterioscópico para los exudados; con uno de los hisopos se prepara un frotis para tinción de Gram, deslizando el hisopo suavemente sobre el portaobjetos con el fin de evitar  la ruptura de las células. Observar bacterias al microscopio y la posible presencia de células clave.

2. El examen en fresco se realiza usando otro hisopo.
3. Se agita con suavidad el hisopo dentro del tubo con SSF y luego, con el mismo hisopo, se pone una gota en un portaobjetos y se cubre con un cubreobjetos.Se observa al microscopio para observar la posible presencia del protozoario patógeno Trichomonas,  levaduras, leucocitos y eritrocitos.

 

Cultivos

1.       Se inocula el exudado en los agares sangre, EMB, chocolate y en Biggy, rotando el hisopo, cada vez que se deposite el inóculo en los diferentes medios.

2.       Con un asa calibrada continuar el sembrado por aislamiento en cada caja..

3.       Incubar a 37º C por 24 horas y el agar chocolate en condiciones de microaerofilia.

Segunda sesión

1.       Se  observan las características de las colonias desarrolladas en los medios inoculados.

2.       Preparar frotis y teñir con Gram a las colonias aisladas, crecidas en los medios, para el estudio de la morfología microscópica.

3.       De acuerdo a los resultados obtenidos, se resiembran las colonias sospechosas patógenas en las pruebas bioquímicas.

Tercera sesión

Revisión de las pruebas bioquímicas.

CUESTIONARIO

1.       ¿Cuáles son las indicaciones que se le debe dar a la paciente para prepararla para la toma del exudado vaginal?

2.       ¿Qué son las células clave y que significado tiene su presencia en el exudado vaginal?

3.       Describe el fundamento de la prueba de aminas.

4.       Si Trichomonas y levaduras no son bacterias, ¿por qué es importante reportar su presencia en el laboratorio de bacteriología?

5.       ¿Cuáles son los principales microorganismos patógenos que podemos encontrar en el exudado vaginal?

6.       Explica el papel biológico que desempeñan los bacilos de Döderlein en el canal vaginal.

7.       Explica el fundamento de los medios de cultivo empleados en esta práctica.