Práctica #5 Coprocultivo

UNIVERSIDAD AUTÓNOMA DE NAYARIT

UNIDAD ACADÉMICA DE CIENCIAS QUÍMICO BIOLÓGICAS Y FARMACÉUTICAS

PROGRAMA DE QUÍMICO FARMACOBIÓLOGO

BACTERIOLOGÍA MÉDICA

PRACTICA No.5

Coprocultivo

 

Q.F.B. DORA LILIANA LUNA VÁZQUEZ

Q.F.B. NADIA ROXANA MARTÍNEZ RUBIO

Q.F.B. CARLOS ISIDRO RODRÍGUEZ MORALES

INTRODUCCIÓN

Un coprocultivo es un estudio que se realiza para el aislamiento e identificación de bacterias causantes de padecimientos gastrointestinales tales como enteritis, cuadros diarreicos y otros, mediante el cual se logra primero el aislamiento y posteriormente la caracterización de las bacterias presentes en las heces, para así, establecer un diagnóstico etiológico.

La materia fecal puede contener casi todo tipo de bacterias, ya que la flora normal intestinal es muy variada, existen en grandes cantidades. En el estómago e intestino delgado, en individuos normales y en ayunas hay menos de 10³ microorganismos por mL de muestra. Entre los microorganismos que se encuentran en estas zonas como flora normal están:

·      Streptococcus

·      Lactobacillus

·      Haemophylus

·      Candida albicans

En cuanto a intestino grueso, la microflora del colon representa un rico ecosistema compuesto por microorganismos metabólicamente activos muy próximos a la superficie de la mucosa de absorción. 20% de la masa fecal consiste en bacterias estos es 10¹¹ bacterias por gramo de peso húmedo, existen alrededor de 400 especies diferentes y la mayoría son anaerobios obligados. Podemos encontrar como flora normal:

·      Bacteroides

·      Clostridium

·      Fusobacterium

·      Eubacterium

·      Bifidobacterium

·      Lactobacillus

·      Peptostreptococos

·      Enterococcus

·      Enterobacter

PROPÓSITO DE LA PRÁCTICA

El alumno aprenderá las condiciones de muestreo de heces, así como aislará y caracterizará los microorganismos patógenos presentes en dicha muestra.

CRITERIOS DE DESEMPEÑO

El alumno estará capacitado para realizar un corpocultivo cuando:

·      Conozca las condiciones de muestreo de heces.

·      Aprenda la flora normal y patógena más comunes presente en dichas muestras.

·      Conozca el procesamiento de la muestra.

·      Maneje los diferentes medios de cultivo para aislamiento de bacterias patógenas utilizados comúnmente en el laboratorio.

·      Utilice las pruebas bioquímicas adecuadas para la caracterización de una cepa bacteriana aislada.

·      Utilice el antibiograma como herramienta para dar al médico el tratamiento más adecuado al paciente.

DESARROLLO DE LA PRÁCTICA

 

Metodología

 Se procesarán dos muestras: una traída por cada equipo y la otra será una cepa proporcionada por el profesor.

1.     Toma de muestra

Se le indica al paciente las condiciones de toma de muestra, la cuál consistirá en tomar una muestra de heces en un frasco de boca ancha, con tapa hermética estéril. No se debe de llenar el frasco al tope, ni tomar la muestra del excusado. La muestra se recoge de una sola deposición y se debe procesar lo más rápido posible.

2.     Examen Visual

Al recibir la muestra se observan con detenimiento sus características, como color, consistencia y  la presencia de mucosidad, sangre o restos de alimento sin digerir.

3.     Medios de Cultivo

Primera sesión:

a)    Con el asa calibrada tomar aproximadamente un gramo de la muestra de excremento y sembrarla en el caldo tetrationato.

b)    Tanto la muestra de excremento traída por cada equipo como la muestra en caldo proporcionada se inoculan por el método de aislamiento en los medios:

·          Agar  Salmonella  Shigella

·          Agar Sulfito de Bismuto

·          Agar XLD

·          Agar EMB

·          Agar  Verde Brillante

c)     Tanto los medios como el caldo se incuban por 24 horas a 37° C.

Segunda sesión:

a)    Observar el crecimiento anotando la morfología colonial y cambios en los diferentes medios de cultivo. De los medios de cultivo en donde se sembró la muestra de excremento, escoger colonias sospechosas para su análisis mediante las pruebas bioquímicas.

b)    Realizar una tinción de Gram a las colonias de la muestra y de la cepa.

c)     Sembrar las colonias de la muestra y de la cepa para su identificación en las pruebas bioquímicas.

d)    Se realiza una resiembra del caldo tetrationato en agar verde brillante y sulfito de bismuto.

e)    Los medios  y las pruebas bioquímicas se incuban a 37° C por 24 horas.

 

Tercera sesión:

a)    En los medios en los cuales se hizo la resiembra a partir del cultivo del caldo tetrationato observar  (si hubo desarrollo), la morfología colonial y los cambios producidos en el medio.

b)    Realizar tinción de Gram de las colonias nuevas.

c)     Revisar las pruebas bioquímicas para identificar las cepas.

Pruebas Bioquímicas

·          Citrato

·          LIA

·          Kligler

·          RMVP

·          FAD

·          MIO

·          Urea 

 

CUESTIONARIO

1.       ¿Por qué no se realiza en el coprocultivo un Gram directo de la muestra?

2.       ¿Por qué es necesario realizar una siembra de la muestra fecal en caldo tetrationato?

3.       ¿Cuál es la función del yodo en el caldo tetrationato?

4.       Explica el fundamento de los medios de cultivo y de las pruebas bioquímicas empleadas.

5.       Describe la morfología colonial de Salmonella typhi, Shigella spp. y Escherichia coli en los diferentes medios de cultivo empleados.

6.       Observa la imagen de Salmonella y Escherichia en agar verde brillante. ¿A qué se debe que las dos produzcan un cambio de color diferente en el medio?

7.       Describe en un cuadro los resultados que producen Salmonella typhi, Shigella spp. y Escherichia coli en las pruebas bioquímicas empleadas.