Práctica #8 Secreciones

UNIVERSIDAD AUTÓNOMA DE NAYARIT

UNIDAD ACADÉMICA DE CIENCIAS QUÍMICO BIOLÓGICAS Y FARMACÉUTICAS

PROGRAMA DE QUÍMICO FARMACOBIÓLOGO

BACTERIOLOGÍA MÉDICA

PRACTICA No.8

Cultivo de secreciones

Q.F.B. DORA LILIANA LUNA VÁZQUEZ

Q.F.B. CARLOS ISIDRO RODRÍGUEZ MORALES

Q.F.B. NADIA ROXANA MARTÍNEZ RUBIO

INTRODUCCIÓN

En los exámenes de la secreción producida en úlceras, heridas infectadas, nódulos, furúnculos y otras lesiones dermatológicas, pueden encontrarse prácticamente todos los gérmenes patógenos, inicialmente como saprofitos en la piel sana y después como gérmenes causales primarios o invasores secundarios. A veces resulta difícil determinar  la naturaleza del agente infeccioso primario, en virtud de la posible presencia de microorganismos infectantes secundarios y, por redundancia, las infecciones pueden frecuentemente ser mixtas, causadas por la asociación de dos o más géneros bacterianos.

La orientación clínica previa, que sugiera hacia cuál sector bacteriológico debe dirigirse la investigación, es por lo tanto un valioso auxiliar para el bacteriólogo, sobre todo para elegir la técnica especial que habrá de emplearse.

La muestra debe obtenerse, de ser posible, antes de la administración de la terapia antimicrobiana. Es necesario siempre hacer una limpieza estricta de la piel circundante a la lesión , eliminar pomadas o algún medicamento tópico que se haya aplicado y después tratar con algún antiséptico local, como tintura de yodo al 3% y alcohol. Es muy importante obtener el producto de la parte mas profunda de la lesión para aislar los organismos etimológicamente interesantes; tomar el espécimen directamente del tejido lesionado, evitando recoger pus.

Las tomas se realizan, en la mayoría de los casos, por medio de hisopos  de algodón estériles (previamente humedecidos o no), o por raspados, escarificaciones o punciones con hojas de bisturí estériles. En aquellas muestras que deban recogerse o tratarse en forma especial, el método apropiado se incluye al tratar sobre el espécimen en particular. Debe tenerse presente el evitar siempre la desecación de las muestras, haciendo uso de medios de conservación y transporte de los casos que se considere necesario.

En estos exámenes se seguirá el método del “procedimiento general” en lo que corresponde a preparación y tinción de frotis, inoculación de medios de cultivo, mismos que integran el cuadro básico, así como la incubación, procedimientos adicionales para el aislamiento, diferenciación e identificación de los gérmenes y la práctica complementaria de pruebas de sensibilidad a los antibióticos. Los procedimientos particulares de cada caso se describen al tratar el espécimen correspondiente.

PROPÓSITO ESPECÍFICO DE LA PRÁCTICA

Identificar microorganismos presentes en muestras de secreciones para la posterior identificación de los microbios es el objetivo principal de esta práctica, para que así los alumnos comprendan los procedimientos a seguir en la identificación de estos organismos. 

CRITERIOS DE DESEMPEÑO

La persona estará capacitada para el análisis de las secreciones y de realizar el aislamiento de microorganismos cuando:

·      Utilice las técnicas de tinción mas adecuada para la orientación hacia el microorganismo.

·      Sepa elegir los medios de cultivo adecuados para el aislamiento de un microorganismo patógeno encontrado en una muestra de secreciones.

·      Elija y utilice las pruebas bioquímicas adecuadas, para la caracterización de la cepa patógena aislada.

·      Sepa tomar la muestra para su investigación.

DESARROLLO DE LA PRÁCTICA

Metodologia

Toma de muestra

1.       Se descontamina el sitio de la lesión con jabón quirúrgico y alcohol etílico.

2.       El mejor método para recolectar muestras cutáneas de lesiones postulosas o vesiculares consiste en aspirar el líquido o pus de la profundidad de la herida con una aguja o jeringa estéril.

3.       Si no se puede obtener muestra con aguja o jeringa debe usarse un hisopo, y se puede utilizar el pulgar y el índice de una mano (usando un guante estéril) o hacer una pequeña incisión en un absceso cerrado antes de llevar la punta del hisopo profundamente a la herida. Teniendo precaución de no tocar los márgenes cutáneos adyacentes.

4.       Si la muestra esta muy seca se puede humedecer el hisopo con SSF.

5.       Se toman 2 muestras.

Examen directo

6.       Con uno de los hisopos se hace un frotis y se le realiza la tinción de Gram.

7.       Observar al microscopio y anotar los resultados.

Cultivos

8.       Con el hisopo restante se siembra en las cajas con agar sangre, agar sangre base azida, salado manitol, EMB y Biggy (en este orden) rotando el hisopo cada vez que se deposite el inóculo en los diferentes medios y después se realiza la estría aislada para cada caja con el asa calibrada.

9.       Se rotulan las cajas y se incuban a 37º C por 24 horas.

10.    Pasado el tiempo, observar en que cajas hubo crecimiento, las características de cultivo y de las colonias desarrolladas en los diferentes medios, hacer frotis teñido al Gram para el estudio de la morfología microscópica.

11.    Posteriormente realizar las pruebas bioquímicas necesarias para identificar los microorganismos presentes, sean Gram positivos o negativos.

CUESTIONARIO

1.       ¿Qué muestras pueden ser clasificadas como secreciones?

2.       ¿Cómo se procesan las muestras de lesiones oculares y como se toman?

3.       ¿Qué géneros bacterianos es más común aislar de heridas infectadas?

4.       ¿Qué géneros bacterianos es más común aislar de muestras de secreción uretral?